某同学在学完菊花的组织培养内容之后，决定利用课余时间去实践这项技术培养出美丽的菊花来美化教室的环境。 (1)制备MS固体培养基时，一般使用4℃保存的配制好的培养母液来制备。配制时应先根据_____和_____计算各种母液的用量以及_____和_____的用量。整个过程的操作顺序是：_______________。 (2)MS培养基含有_____多种营养成分。其中__________6种属于大量元素；__________9种属于微量元素，能源物质是__________。由于菊花的茎段组织培养比较容易，所以不必加_____。 (3)将分装好的培养基连同培养器械一起进行_____灭菌。 (4)选取菊花的外植体，用_____的乙醇和_____的次氯酸钠溶液来消毒，消毒时间不宜过长。 (5)接种时要特别注意，每瓶接种_____个外植体。盖上封口膜，温度控制在_____，并且每日用日光灯照_____。 (6)若干天后发现有的锥形瓶长出可爱的菊花幼苗，有的锥形瓶培养失败，还长出许多杂菌菌落。试分析其可能的原因。
【精讲精析】在配制MS固体培养基时，先确定培养基的体积，根据母液的浓缩倍数计算用量，并加蒸馏水稀释。培养基的成分应包括：琼脂(作为凝固剂)、蔗糖(作为碳源)、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液，并用蒸馏水定容到1 000毫升，调节适宜的pH，分装灭菌后备用。在菊花组织培养中，可以不添加植物激素，原因是菊花茎段组织培养比较容易。灭菌采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。组成 生物体的元素大约有20多种，其中属于大量元素的有N、P、K、Ca、Mg、S等，属于微量元素的有Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co、Cl等。选取了材料以后要进行消毒，先在70%的乙醇中浸泡10min，再放入5%的次氯酸钠溶液中浸泡5min，然后用另一5%的次氯酸钠溶液浸泡5min，较后在超净台中用无菌水清洗。利用无菌技术将外植体接种到锥形瓶中，盖上封口膜，放在18℃～25℃的环境中培养，保持每天光照不少于14.5h。若外植体消毒不彻底或是培养基灭菌不彻底，或操作过程中混入杂菌，都会使实验失败，得不到植株幼苗。
答案：(1)要配制的培养基的体积 各种母液的浓缩倍数 琼脂 蔗糖 计算→称量→融化→加母液→定容→调pH→分装→灭菌
(2)20 N、P、K、Ca、Mg、S Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co、Cl 蔗糖 植物激素
(3)高压蒸汽
(4)体积分数为70% 5%
(5)2～3 18 ℃～25 ℃ 不少于14.5h (6)外植体消毒或培养基灭菌不彻底,接种时无菌操作不规范。
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